摘要:目的表达CJPEB1重组蛋白，制备并鉴定CJ PEB1蛋白的单克隆抗体。方法诱导培养工程菌E．co-liBL21（DE3）表达CJPEB1重组蛋白，以PEB1蛋白溶液与等体积的佐剂完全乳化作为免疫原常规免疫BALB／C小鼠，制备单克隆抗体。无菌取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0进行融合，建立杂交瘤细胞株。将建株的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔诱生腹水制备抗体，应用间接ELISA法和双向琼脂扩散试验检测腹水中抗体的效价，应用Western-blot和玻片凝集试验检测抗体的特异性。结果得到高纯度的CJPEB1重组蛋白，蛋白质分子量大小与预计的理论值相符。获得两株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。两株杂交瘤细胞诱生的腹水，经间接ELISA法检测，腹水中的抗体效价分别为8×10^4和5×10^4，经双向琼脂扩散试验检测效价均为1：16。通过Westem-blot鉴定，两株杂交瘤细胞分泌的抗体均与PEB1蛋白特异性地结合；其诱生的腹水与CJ菌液混合出现凝集现象，而与大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌等菌液混合均未出现凝集现象。结论成功建立了两株稳定分泌抗CJPEB1重组蛋白抗体的杂交瘤细胞株并制备了抗CJPEB1蛋白的单克隆抗体，为今后研究多种检测CJ的方法创造了条件。